紫外可見光分光光度計的工作原理是由光源發出連續輻射光，經單色器按波長大小色散為單色光，單色光照射到吸收池，一部分被樣品溶液吸收，未被吸收的光經檢測器的光電管將光強度變化轉變為電信號變化，并經信號顯示系統調制放大后，顯示或打印出吸光度A（或透射比T），完成測定。
紫外可見光分光光度計由光源室、單色器、樣品室、光電管暗盒、電子系統及數字顯示器等部件組成，儀器內部光路系統。從鎢燈或氫燈發出的連續輻射經濾色片選擇聚光鏡聚光后投向單色器進狹縫，此狹縫正好位 于聚光鏡及單色器內準直鏡的焦平面上，因此進入單色器的復合光通過平面反射鏡反射及準 直鏡變成平行光射向色散光柵。光柵將入射的復合光通過衍射作用形成按照一定順序均勻排 列的連續單色光譜，此時單色光譜重新返回到準直鏡，然后通過聚光原理成像在出射狹縫上 。出射狹縫選出帶寬的單色光通過聚光鏡落在試樣室被測樣品中心，樣品吸收后透射的 光經光門射向光電管陰極面。根據光電效應原理，會產生一股微弱的光電流。
紫外可見光分光光度計主要由電光系統、光學系統、光電系統、電子系統和數據處理、輸出打印系統等幾個部分組成。
紫外可見光分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。紫外可見分光光度計是各種涉及水和廢水分析領域的通用儀器，應用范圍包括市政和工業廢水，飲用水，加工過程用水，地表水，冷卻水和鍋爐補給水等。
紫外可見光分光光度計安裝環境的要求有：
(1)實驗室環境要求：主要包括環境溫濕度、環境潔凈狀況、光及磁場干擾等。具體要求如下：
①環境溫濕度 儀器應安放在干燥的房間內，使用溫度為5～35℃，相對濕度不超過85%，應控制在45%～65%，無冷凝。如有條件，應配備去濕機（空調）、濕度計等，在相對濕度較大的地區應在儀器周圍放一些干燥劑。
②無強光干擾及磁場干擾 室內照明不宜太強，且避免直射日光的照射。儀器應盡量遠離高強度的磁場、電場及發生高頻波的電器設備，防電磁干擾。
③防止腐蝕性氣體 避免在有硫化氫、：二氧化硫以及各種酸霧等腐蝕性氣體的場所使用，以免侵蝕儀器的約部件。
在使用紫外可見分光光度計時，需要注意一些使用的維護措施：
1、使用的吸收池必須潔凈，并注意配對使用。量瓶、移液吸管均應校正、洗凈后使用。
2、取吸收池時，手指應拿毛玻璃面的兩側，裝盛樣品以池體的4/5為度，使用揮發性溶液時應加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應無溶劑殘留。吸收池放入樣品室時應注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。
3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。
4、測定時除另有規定外，應以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm石英吸收池，在規定的吸收峰±2nm以內，測幾個點的吸收度或由儀器在規定的波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度zui大的波長作為測定波長，除另有規定外吸收度zui大波長應在該品種項下規定的測定波長±2nm以內。
5、選用儀器的狹縫寬度應小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度值會偏低，狹縫寬度的選擇應以減少狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準，對于大部分被測品種，可以使用2nm縫寬。
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